空间转录组是从空间层面上解析RNA-seq数据的技术,从而解析单个组织切片中的所有mRNA,从而能够定位和区分功能基因在特定组织区域内的活跃表达。
细胞在组织内的物理位置是决定其分子特性的关键因素
10x Genomics空间转录组用于文库构建的每张载玻片上有四个捕获区域,每个捕获区域的大小为6.5×6.5mm,包含5000个被条形码标记的点(barcoded spots),每个点的直径为55 μm,点和点之间中心的距离为100 μm,并且每个点都有一个唯一的barcode序列。
组织切片的细胞中会释放出mRNA,迁移到每个spot的mRNA会被标记上相应的barcode序列,然后进行文库构建并进行测序。
最后,根据数据的条形码信息对数据进行分析,以确定哪些数据来自哪个位置,从而实现空间基因表达的可视化。
通过添加基因表达维度,得出形态学结论
免疫细胞浸润、免疫细胞中的基因表达特征
发现组织背景中与形态形成有关的基因
绘制大脑的各个细胞层、区分正常与患病的大脑解剖特征
肿瘤微环境、肿瘤异质性、病程进展、癌症形态、肿瘤浸润淋巴细胞
?小鼠肾脏空间转录组的mRNA表达及聚类
A代表组织切片的HE染色。B和C分别代表UMI计数和总基因计数与组织空间位置的图像叠加。D代表基于总体差异表达基因的空间聚类结果,最右边显示了cluster2排名前10的特异表达基因。E、F、G、H分别代表了不同基因的空间mRNA表达。
小鼠大脑空间分辨率的基因表达
A代表组织切片的HE染色。B和C分别代表海马组织的标记基因Tmsb4x和Selenow基因的空间表达情况,结果显示这两个基因在海马体中显著高表达,符合已知的基因表达模式
样本类型、Coverage、表达量不同、数据量也会不同,数据量推荐≥50k reads pairs per spot,(50% tissue coverage * 5000 total spots) * 50,000 read pairs per spot= 125 million read pairs (250M total reads)。故,推荐数据量30G-60G/样
实验流程为:新鲜组织取样-异戊烷冻存-OCT包埋-冷冻切片-染色-显微镜观察-建库测序 需要客户准备:新鲜组织取样–异戊烷冻存(保存或运输)–OCT包埋–保存或运输 客户在制备样本时,需要准备3份样本(至少2份),每块组织样本不宜过大(长宽高约0.8 cm )
a.一份用于常规RNA提取,以确保样本自身及样本制备不存在问题,当RNA RIN>8时,可进行后续实验
b.一份用于正常的切片实验
c.一份用作备份
详情见:【空间转录组】样本制备(一)
时间 | 期刊 | 题目 | IF | 类别 |
---|---|---|---|---|
2020.01 | Nature Biotechnology | Integrating microarray-based spatial transcriptomics and single-cell RNA-seq reveals tissue architecture in pancreatic ductal adenocarcinomas | 31.864? | PDAC肿瘤异质性 |
2020.01 | Nature cell biology | Combined single-cell and spatial transcriptomics reveal the molecular, cellular and spatial bone marrow niche organization | 17.428 | 骨髓造血微环境 |
2019.12 | Cell | A Spatiotemporal Organ-Wide Gene Expression and Cell Atlas of the Developing Human Heart | 36.216 | 人类心脏发育 |
2019.04 | Science | Spatiotemporal dynamics of molecular pathology in amyotrophic lateral sclerosis | 41.037 | 肌萎缩性侧索硬化症 |
2018.11 | Nat Protoc | Barcodedsolid-phase RNA capture SpatialTranscriptomics pro?ling mammaliantissue sections | 11.334 | 实验方法 |
2018.10 | Cancer Research | Spatially Resolved Transcriptomics Enables Dissection of Genetic Heterogeneity in Stage III Cutaneous Malignant Melanoma | 8.378 | 黑色素瘤异质性 |
2018.06 | Nat Commun | Spatial maps of prostate cancer transcriptomes reveal an unexplored landscape of heterogeneity | 11.878 | 前列腺癌异质性 |